大鼠/小鼠 SRY DNA 生物素标记（POD）和荧光（FISH）原位杂交双染色系统

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试剂盒内容

SRY试剂： 3% H2O2去离子水 6ml

SRY试剂：大鼠/小鼠SRY阴性探针 200ul

SRY试剂A： 大鼠/小鼠SRY探针杂交液 1ml

SRY试剂B： 复合消化液 3ml

SRY试剂C： POD 转化剂 3ml

SRY试剂D： FITC复合物 临用前1:20稀释 0.1ml

SRY试剂E： 2 X SSC干粉2000ml 1包

SRY试剂F： DAB Kit 1

说明书 1

SRY BIO ISH 原位杂交实验方法-POD （基因组DNA）

基因组DNA Bio（POD）探针染色步骤：

石蜡切片的复水梯度乙醇复水：用纯水配制95%-80%-60%-30%的梯度乙醇（3-5 分钟/次）。细胞爬

片/涂片/冰冻切片不需梯度乙醇，直接进行下一步实验。

1，滴加3% H2O2

去离子水室温10 分钟。

2，滴加SRY 试剂B（复合消化工作液），覆盖组织表面，37 度10 分钟。0.1mol TBS PH 7.8 洗3-5 次每

次洗涤5 分钟。

3， 95-100 摄氏度0.1mol （* PH 8.9* ）TBS 溶液孵育20min，后迅速以0.1mol 冷TBS 冲洗三次5min/

次-（0 度洗涤）。0.2XSSC 洗一次5min/次-（0 度洗涤）。

4， 滴加SRY 试剂A（杂交工作液）覆盖组织37 度湿盒孵育4-8 小时。

5， 杂交后的洗涤2Xssc 37 度洗三次，每次洗涤3 分钟，0.2Xssc 37 度洗三次，每次洗涤3 分钟，0.1 mol

PH7.8 TBS 37 度洗3-5 次每次洗涤2 分钟。

6， 滴加SRY 试剂C （POD 转化剂）覆盖组织，37 度45 分钟。0.01M PBS 冲洗三次，每次洗涤5 分钟。

7, SRY 试剂F （DAB）显色,光学显微镜下观察至细胞内胞浆阳性颜色与细胞外背景颜色对比度反差明显

时蒸馏水洗终止反应（显色时间约为10-20 分钟）。细胞核显棕黄色色颗粒为阳性反应。苏木复染。

8, 80>90%>无水乙醇>二甲苯脱水,每步须3-5 分钟，中性树胶封片保留。